Hệ thống Máy Sinh Học Phân Tử

lượt xem 13,769 lượt xem

1. ĐẶC ĐIỂM

  • Real-time PCR là một cải tiến của phương pháp PCR dựa trên chức năng 5’-3’ polymerase của Taq DNA Polymerase do Holland và cộng sự công bố năm 1991. Trong phản ứng Real-time PCR, người ta thường sử dụng hai tác nhân phát huỳnh quang bao gồm tác nhân gắn vào DNA mạch đôi (Ethidium Bromide, SYBR Green, EvaGreen ...) hoặc tác nhân dùng đánh dấu mẫu dò đặc hiệu (FAM, HEX ...). Trong phản ứng, khi có sự hiện diện của các sản phẩm DNA mạch đôi do quá trình nhân bản thì các tác nhân liên kết với DNA mạch đôi như SYBR Green sẽ liên kết với các sản phẩm vừa được tạo ra này và phát tín hiệu huỳnh quang mạnh hơn so với trạng thái tự do trong dung dịch. Loại tác nhân huỳnh quang này có thể sử dụng được cho mọi trình tự đích nên chi phí sẽ thấp; nhưng độ đặc hiệu của sản phẩm phải được kiểm tra chặt chẽ thông qua một bước phân tích bổ sung sau khi phản ứng nhân bản kết thúc, gọi là phân tích đường cong nóng chảy.
  • Cường độ tín hiệu huỳnh quang tỉ lệ thuận với hàm lượng sản phẩm đích đang được nhân bản trong phản ứng. Các tín hiệu huỳnh quang phát ra sẽ được các đầu dò của máy luân nhiệt real-time PCR thu nhận và xử lý. Khi cường độ tín hiệu huỳnh quang của mẫu vượt qua đường tín hiệu huỳnh quang nền của phản ứng thì mẫu được xem là dương tính và người ta lấy thời điểm vượt qua đó (biểu hiện qua giá trị chu kỳ ngưỡng – Ct) để so sánh với một đường cong chuẩn đã biết để suy ra nồng độ trình tự DNA đích trong mẫu thử nghiệm ban đầu. Đường cong chuẩn được xây dựng từ chu kỳ ngưỡng của các mẫu chuẩn có chứa sản phẩm đích đã biết trước nồng độ.
  • Định lượng DNA, RNA là ứng dụng phổ biến nhất của phương pháp này. Trong lĩnh vực chẩn đoán bệnh, kỹ thuật real-time PCR được ứng dụng rộng rãi để phát hiện và định lượng các tác nhân gây bệnh ở người như virus, vi khuẩn, nấm phục vụ cho chẩn đoán và theo dõi điều trị.


    2. HỆ THỐNG MÁY XÉT NGHIỆM REALTIME PCR TẠI TRUNG TÂM Y KHOA PHƯỚC AN
  • Tại Phước An, các phòng xét nghiệm được trang bị Máy Rotor-Gene Q là hệ thống realtime PCR được chứng nhận EU IVD xét nghiệm lâm sàng trên vật liệu di truyền.
  • Máy có hiệu năng gia nhiệt và quang học ưu việt do sử dụng rotor thay cho block nhiệt Peltier, giúp tiết kiệm thời gian thực hiện PCR.
  • Hệ rotor:
    +  Độ dao động chính xác từng giếng 0.02oC (thấp hơn 10 lần so với máy dạng block nhiệt).
    +  Tốc độ gia nhiệt cao và thời gian đạt đến cân bằng rất thấp, giúp thời gian chạy ngắn.
    +  Rotor được quay với tốc độ 400 vòng/phút nên không có sự khác biệt về nhiệt độ giữa các mẫu, đảm bảo tính chính xác cho thiết bị realtime PCR.
  • Hệ quang học:
    +  Hệ thống quang học đáp ứng yêu cầu của các phương pháp dùng thuốc nhuộm như SYBR Green, probe như Tagman, hoặc FRET và nhiều hóa chất khác,
    +  Máy có 5 kênh màu chuẩn (Green, Yellow, Orange, Red, Crimson) dùng với các thuốc nhuộm/probe phổ biến như FAM, SYBR Green, JOE, VIC, HEX, TET,
    +  Do không có sự biến đổi nhiệt độ giữa các giếng nên không cần sử dụng thuốc nhuộm tham chiếu ROX trong mẫu,
    +  Thu nhận số liệu nhanh: 72 mẫu có thể được thu nhận số liệu trong vòng 0.15 giây,
    +  Khi sử dụng 5 kênh chạy multiplex, độ lẫn chéo giữa các kênh nhỏ hơn 1%, không cần bù giữa các kênh để phân tích số liệu.

Bên cạnh đó để thực hiện xét nghiệm PCR cho kết quả chính xác còn đòi hỏi việc ly trích mẫu bệnh phẩm chính xác cao, vì vậy phước An còn trang bị thêm máy ly trích mẫu tự động


3. ÁP DỤNG TRONG LÂM SÀNG

Các xét nghiệm PCR được áp dụng nhiều trong bệnh học giúp các bác sĩ chẩn đoán bệnh chính xác cũng như đánh giá quá trình điều trị của các bệnh lý có liên quan như:

  • HBV-DNA: Giúp chẩn đoán chính xác bệnh viêm gan do siêu vi B, giúp đánh giá và theo dõi quá trình điều trị.
  • HCV-RNA:  Giúp chẩn đoán chính xác bệnh viêm gan do siêu vi C, giúp đánh giá và theo dõi quá trình điều trị.
  • Và trong 1 số bệnh lý khác như Lao, sốt xuất huyết,......




Thống kê truy cập
Lượt truy cập / ngày: đang tải dữ liệu
Lượt truy cập / tuần: đang tải dữ liệu
Lượt truy cập / tháng: đang tải dữ liệu
Tổng lượt truy cập: đang tải dữ liệu
Số lượt online: đang tải dữ liệu

Back to Top